Evaluación de la Susceptibilidad Antimicrobiana de Porphyromonas gingivalis Aisladas de Pacientes Periodontales en Población Chilena

RESUMEN: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) es un microorganismo frecuentemente aislado en pacientes con periodontitis, en los que también se incluye los de la población chilena. El modelo de "Keystone bacteria" demostró que P. gingivalis induce la disbiosis del biofilm subgingival y permite el desarrollo de algunas especies sobre otras, modulando la patogenicidad de la comunidad microbiológica completa. El tratamiento de la periodontitis es principalmente mecánico, pero en condiciones específicas es necesario el complemento con antibioterapia. Los estudios globales de antibióticos evaluados en ensayos clínicos y estudios in vitro han mostrado resultados mixtos en cuanto a eficacia y susceptibilidad. Este estudio descriptivo tuvo como objetivo evaluar el perfil de susceptibilidad antimicrobiana in vitro a metronidazol, clindamicina, amoxicilina más ácido clavulánico, moxifloxacino y azitromicina de P. gingivalis aisladas de pacientes periodontales chilenos. Se obtuvieron muestras microbiológicas de pacientes con diagnóstico de periodontitis estadíos III y IV generalizada, las que se sometieron a procesos de identificación mediante un espectrómetro de masas (MALDI-TOF MS). Posteriormente, a cada muestra positiva a P. gingivalis se aplicó el protocolo gold standard de susceptibilidad para los cinco antimicrobianos evaluados (Dilución en Agar Sangre Brucella- McFarland 0.5). Se seleccionaron 50 pacientes (25 mujeres, 25 hombres) entre 34-69 años. Finalmente, se recuperaron 25 cepas de P. gingivalis (50 %) para el análisis de susceptibilidad y todas ellas fueron sensibles a todos los antibióticos evaluados (100 % susceptibilidad). Las cepas de P. gingivalis fueron altamente sensibles a los cinco antibióticos evaluados en esta población, lo que podría implicar contar con diferentes alternativas de tratamiento farmacológico antimicrobi ano como complemento al tratamiento mecánico convencional en pacientes específicos.

ABSTRACT: Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) is a microorganism frequently isolated in patients with periodontitis, which also include those of Chilean population. The "Keystone bacteria" model demonstrated that P. gingivalis induces dysbiosis of the subgingival biofilm and allows the development of some species over others, modulating the pathogenicity of the entire microbiological community. The treatment of periodontitis is mainly mechanical; nevertheless, under specific conditions the complement with antibiotherapy is needed. Global studies of antibiotics evaluated in clinical trials and in vitro studies have shown mixed results in terms of efficacy and susceptibility. This descriptive study aimed to evaluate antimicrobial susceptibility profile in vitro to metronidazole, clindamycin, amoxicillin plus clavulanic acid, moxifloxacin and azithromycin of P. gingivalis isolated from Chilean periodontal patients. Microbiological samples were obtained from patients with a diagnosis of generalized periodontitis stages III and IV, which were exposed to identification processes by a mass spectrometer (MALDI-TOF MS). Subsequently, the gold standard susceptibility protocol for the five antimicrobials evaluated was applied to each P. gingivalis- positive sample (Dilution in Brucella-McFarland Blood Agar 0.5). 50 patients (25 women, 25 men) between 34-69 years old were selected. Finally, 25 P. gingivalis strains (50 %) were recovered for susceptibility testing and all of them were susceptible to all antibiotics tested (100 % susceptibility). P. gingivalis strains were highly susceptible to the five antibiotics evaluated in this population, which could implies counting different antimicrobial pharmacological treatment alternatives as a complement to conventional mechanical treatment in specific patients.

Impacto de la espectrometría de masas por MALDI-TOF MS en la identificación rápida de bacterias aeróbicas y anaeróbicas de importancia clínica / Impact of mass spectrometry by MALDI-TOF MS for the rapid identification of aerobic and anaerobic bacteria of clinical importance

Background: MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization -Time of Flight Mass Spectrometry) technology, recently introduced in the microbiology laboratory has proven to be a precise and rapid method for bacterial identification. Objective: To evaluate the performance, costs associated and turnaround time of MALDI-TOF in a routine laboratory. Material and Method: Five hundred and sixty one clinical isolates (281 aerobes and 280 anaerobes) previously identified by conventional methods were evaluated. Discordances were resolved by means of 16S rRNA sequencing. Results: MALDI-TOF identified 95, 7% of the aerobes isolates and 86, 4% of the anaerobes. The groups with better performance were the enterobacteriacea and Bacteroides spp with 95% and 100% identification at the species level. The error rate of MALDI-TOF and conventional methods compared to sequencing was 0, 39% and 9, 4% respectively. The costs associated were 8 times lower with a turnaround time of 6 hours. Conclusion: MALDI-TOF proved to be simple, precise and less expensive technology compared to the traditional methods.

Introducción: La tecnología MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry) incorporada recientemente en el laboratorio de microbiología ha demostrando ser un método rápido y preciso para la identificación bacteriana. Objetivo: Evaluar el desempeño de MALDI-TOF para la identificación de aislados clínicos, comparar los costos asociados y el tiempo en la entrega de resultados en un laboratorio de rutina. Material y Método: Se evaluaron un total de 561 aislados de pacientes (281 aeróbicos y 280 anaeróbicos estrictos) identificados previamente por métodos convencionales, los que fueron identificados por MALDI-TOF. Las discordancias fueron resueltas mediante secuenciación del 16S ARNr. Resultados: MALDI-TOF identificó adecuadamente a 95,7% de los aislados aeróbi-cos y 86,4% de los anaeróbicos estrictos, observándose el mayor porcentajes de identificación a nivel de especie en los grupos de enterobacterias y Bacteroides spp (95 y 100% respectivamente). La tasa de error de MALDI-TOF y métodos convencionales vs secuenciación fue de 0,39 y 9,4%, respectivamente. El costo asociado por identificación fue ocho veces menor que el de los métodos tradicionales con una demora promedio de seis horas en la entrega de resultados. Conclusión: MALDI-TOF mostró ser una tecnología simple, precisa y de menor costo que los métodos tradicionales.